解决方案:当从基因组DNA进行PCR失败时,除去一些一般的 PCR问题(遗忘、污染或者加入错误的试剂),模板降解是最常见的问题。取几微克基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,确认可以呈现出一个单独的高分子质量的条带(大于20kb)。 如果出现了“笑脸型”的条带(尤其小于5kb),则需要更换新的模板。如果模板的质量很好但是PCR失败了,我们需要用一对不同的引物(最好是之前以同样的模板成功进行过片段扩增的引物)来检测是否模板已经被污染或者引物抑制了PCR。我们或许有必要来设计新的引物,如果可以在其他不同的区域来设计引物,则可以将一条或者两条引物相对于原始的位点向上游或者下游移动50~100bp.当确定了引物的大体位置,我们可以在不超过溶解温度的前提下在3端加上或者去除一些核苷酸。