双分子荧光互补(BiFC)服务

双分子荧光互补(BiFC)服务

双分子荧光互补(BiFC)可以直接,快速地确定目标蛋白在活细胞中的位置和相互作用。是研究蛋白质相互作用的新兴技术。
实验原理
外源片段插入荧光蛋白家族(YFP、GFP、Luciferase等)的特异性位点不会影响GFP的荧光活性,基于此特性,该技术将它们分为两个非荧光蛋白片段,即N片段和C片段。当两种相互作用的蛋白质分别与N片段和C片段连接时,它们形成融合蛋白并在活细胞中一起表达。光蛋白的N端和C端片段可以彼此靠近并形成活性荧光基团以发出荧光。
双分子荧光互补原理图
BiFC的应用特点
  • 在活细胞生理环境中直接、原位显示蛋白质相互作用产物。
  • 不同的双分子荧光复合物之间的光谱差异能够满足以不同的颜色在同一细胞中同时显示多种蛋白质间相互作用的需要。
  • 双分子荧光复合物的形成不需要外加底物和辅助因子,使蛋白质相互作用的检测对细胞的干扰降低到最低程度。
  • bifc具有的灵敏度足以检测与内源性表达水平相当的蛋白质间的相互作用,从而使实验结果更真实的反映天然蛋白的特性。
  • 除普通荧光显微镜外,利用bifc进行蛋白质相互作用分析不需要特殊仪器,实验结果也不需要进行复杂的数据处理或荧光校正。

服务项目 说明 周期 交付产品
表达质粒构建 基因优化
亚克隆设计
合成基因
亚克隆至载体
载体构建1-2周 表达质粒
基因合成报告
农杆菌
BiFC实验 质粒转化农杆菌
农杆菌转染烟草
互作蛋白瞬时表达
实验结果观察拍照
表达鉴定3-4周 BiFC实验报告
实验原始图片

案例展示
            

图1 B与A1/A2/A3烟草BiFC对应Control结果            图2 B与A1/A2/A3烟草BiFC实验结果

    图1所示,对照组均未有荧光信号;图2所示,B-YC与A2-YN及YN-A3共转染后瞬时表达,能观察到明显的荧光, 由此可知B蛋白与A2和A3蛋白存在互作;B-YC与A1-YN共转染瞬时表达后,可观察到微弱的荧光,由此可知B与 A1也存在互作。