酵母单杂交文库筛选技术服务

酵母单杂交是在酵母细胞内研究DNA与蛋白质之间的相互作用的一种技术。在DNA与蛋白质相互作用研究中的应用主要体现在以下几个方面:①鉴定已知DNA和已知蛋白质之间是否存在相互作用;②分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点的新蛋白质;③准确定位已经证实的具有相互作用的DNA结合位点和对蛋白质的DNA结合结构域进行分析。

实验流程

辅助启动子的设计及诱饵载体的构建；
诱饵质粒的自激活检测；
文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞；
文库筛选和3AT或者ABA优化；
文库筛选结果测序分析；
筛选结果回转验证。
详细报告的整理和数据发送。

一、我们的特色

1：使用定制特色文库：使用优化后的clonetech的pGADT7或者pGADT7-Rec2两套载体构建酵母文库；
2：使用商品化cDNA文库。

二、酵母单杂交原理

许多真核生物的转录激活因子具有2个功能独立的结构域，即特异结合于顺式作用元件上的DNA结合结构域DNA结合结构域(DNA—bindingdomain，BD)和发挥基因调控功能的DNA激活结构域转录激活结构域(activationdomain，AD)，这两个结构域单独作用均不能启动下游报告基因的表达。酵母单杂交技术就是依据这个原理，通过构建可与转录激活结构域结合的蛋白，然后与特异的DNA序列相结合，进而启动下游报告基因的表达。

三、酵母单杂交技术特点

1、酵母单杂交技术简单易行，在这个过程中，可直接识别与顺式作用元件结合的蛋白质，也可以直接从文库中筛选到蛋白质的编码序列，而不需要分离纯化蛋白等操作步骤;
2、酵母是真核生物的模式物种，在其体内进行研究更接近真核生物的基因表达调控情况;
3、利用酵母单杂交技术检测到的与DNA相互作用的蛋白质处于自然构象，避免了体外研究中的不足。
4、市面上已有多种商品化的酵母单杂交体系的试剂盒和相应的cDNA文库，为酵母单杂交体系的使用提供了有利的条件。

四、服务详情

服务步骤	周期（工作日）	交付材料	报价
A、诱饵质粒的合成及扩增	15-20	1、诱饵质粒 2、自激活检测图片 3、初筛图片 4、复筛图片 5、测序及分析结果+阳性克隆菌液 6、验证图片+验证的AD质粒 7、验证图片 8、项目报告	询价
B、线性化诱饵质粒	10-15
C、整合线性化诱饵质粒至Y1H
D、鉴定测序及比对分析
E、自激活检测
F、初筛	15-20
G、复筛
H、阳性克隆测序
I、一对一验证（点对点）	15-20
J、点板验证
K、项目结束