酵母文库构建技术服务

目前，酵母双杂交及其衍生技术已被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域，成为分子生物学研究领域的重要实验手段，同时国内外科研工作者通过该技术揭示了大量已知或者未知蛋白相互作用的分子机制。

正和生物致力于科研的最前沿，在构建核体系酵母文库和膜体系酵母文库均有丰富的经验，熟练运用gateway和smart两套体系进行建库，通过多道工序，严格把控质量。文库质控：平均插入片段＞1200bp；文库原始库容量＞1*10^⁷CFU；文库空载率＜5%。

一、我们可以提供的服务

一、我们的优势

质量控制严格

质量管理体系完善，严格把控多道工序，多轮质控，拥有大量的项目经验，保证质量可靠性。

性价比高

流程虽繁必不敢省人工，试剂虽贵必不敢减物力。

周期短

15个工作日完成建库，比传统实验方式节省35%的周期。

配套多

GST pull down、BiFC、Co-IP等多方面配套服务为文章提供更多数据支持。

一、实验原理

酵母双杂交系统是基于对真核细胞调控转录起始过程的认识的基础上而建立的。基因的表达由转录激活因子来激活，转录激活因子必须依靠DNA结合区(BD) 和激活区(AD)这两个结构域来发挥作用。BD或AD单独作用不能激活转录反应，但当两者在上游较为接近时则呈现完整的转录因子活性，启动下游基因的表达。因此，将DNA- BD序列与已知的蛋白质X (诱饵蛋白)融合，构建BD-X融合表达载体，将AD与拟研究的蛋白Y (Prey) 或基因片段、cDNA文库融合，构建AD-Y融合表达载体，然后把这两个融合表达载体同时导人酵母细胞中，如果X蛋白和Y蛋白可相互作用，则可使BD和AD在空间上相互接近形成-一个有效的转录激活因子，从而激活UAS ( upstream activating sequence)下游启动子，启动下游报告基因的表达，反之，BD与AD就不能结合，报告基因也不能被启动表达。

二、技术应用

三、文章案例

案例文章1：

标题为“GmNAC8 acts as a positive regulator in soybean drought stress” 通过酵母文库、蛋白互作及转基因功能验证揭示了GmNAC8在大豆干旱胁迫中起正向调控作用。

研究背景：

NAC蛋白是参与调控植物发育和非生物胁迫的最大转录因子家族之一。大豆NAC转录因子GmNAC8可能参与大豆对干旱胁迫的耐受性。

研究问题：

大豆GmNAC8基因在大豆抗旱性调控中的具体作用。

研究结果：

1、GmNAC8蛋白定位于细胞核，GmNAC8基因在干旱、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)处理下显著诱导表达。

2、大豆GmNAC8基因正调控大豆对干旱的耐受性。

3、通过筛选大豆干旱酵母文库发现GmNAC8蛋白与干旱诱导的GmDi19-3蛋白在细胞核中存在物理相互作用。

4、GmNAC8的互作蛋白GmDi19-3也可以被干旱、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)诱导表达，并正调控大豆对干旱的耐受性。

案例文章2：

标题为“Screening and identification of host proteins interacting with Iris. lactea var. chinensis metallothionein IlMT2a by yeast two-hybrid assay”通过酵母双杂交揭示：金属硫蛋白基因IlMT2a在镉胁迫耐受性中的作用。

研究背景：

马蔺是一种具有耐镉性的植物，其金属硫蛋白基因IlMT2a被认为可以用做提高植物耐镉性的重要基因。

研究问题：

对镉处理后的马蔺cDNA构建酵母文库，使用IlMT2a作为诱饵基因进行酵母双杂交筛选与耐镉性相关的互作的蛋白，解析IlMT2a基因在镉胁迫中的作用机制。

研究结果：

1、对互作蛋白基因序列进行分析，鉴定了几种与光合作用、金属诱导的活性氧和运输系统相关的宿主蛋白