酵母三杂交筛库
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酵母三杂交技术服务
酵母双杂交是目前研究两种蛋白质互作的首选方法,但是大多数天然蛋白质复合物是由两种以上的蛋白质形成的,即使在两种蛋白质相互作用的情况下,通常也需要第三种蛋白质来稳定或促进两个蛋白之间的结合,为了研究这种高阶蛋白质复合物,酵母三杂交(Y3H)系统应运而生。
一、实验原理
三杂交与酵母双杂交系统相同,由于酵母Gal4转录激活子包括DNA结合域(DNA binding domain,DNA-BD)和转录激活域(activation domain,AD),将DNA-BD与诱饵蛋白X融合,AD与靶蛋白Y融合,通过三种介导如:小分子、RNA或蛋白重组成有活性的Gal4转录激活子,利用转录激活子调控真核基因转录。
二、技术应用
1.以小分子作为介导的三杂交系统中,,蛋白BD-X与AD-Y由于异源二聚化的小分子复合物的介入,重新组成重新组成具有功能的转录激活子。
2.以RNA作为介导的三杂交系统中,先由DNA结合域(LexA BD或Gal4 BD)与RNA结合蛋白(如MS2-外壳蛋白或Hiv-1 RevM10)融合成第一个杂合蛋白,由转录激活域(Gal4 AD)与感兴趣的RNA结合蛋白Y融合成第二个杂合蛋白。第三个杂合RNA分子包含两个位点,一个是第一个杂合蛋白包含的RNA,另一个是第二个杂合蛋白的结合位点X,三者同时结合形成具有功能的转录激活子。
3.以蛋白作为介导的三杂交系统中,蛋白A与B的稳定相互作用依赖于蛋白Z的存在,其介导相互作用或诱导一个蛋白的构象改变,从而促进与另一个蛋白B的相互作用。
三、服务详情
服务步骤
周期(工作日)
交付材料
报价
A、诱饵载体的构建
80
1、诱饵质粒
2、自激活检测图片
3、初筛图片
4、复筛图片
5、测序及分析结果+阳性克隆菌液
6、验证图片+验证的AD质粒
7、验证图片
8、项目报告
询价
B、诱饵质粒的自激活检测
C、文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞
D、文库筛选和3AT优化
E、文库筛选结果测序分析
F、初筛筛选结果回转验证
G、详细报告的整理和数据发送
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