酵母双杂交筛库

酵母双杂交体系相比较其他蛋白互作技术有着独特的优势.
①真实：酵母细胞是真核细胞，蛋白质有可能保持天然的折叠状态，类似其在体内生理状态下的情况，相比较其他体外验证方法，它所验证的蛋白质间相互作用将更接近于体内的真实情况。
②灵敏：双杂交系统的敏感度极高，蛋白质之间结合常数低至1mmol/L 左右的微弱作用都可被检测到。许多微弱或短暂的蛋白质之间的相互作用可以借助报道基因表达过程中的多级放大效应反映出来。
③效率：在筛选cDNA 文库时，双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列，它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白，省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。

一、实验流程

实验流程

辅助启动子的设计及诱饵载体的构建；
诱饵质粒的自激活检测；
文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞；
文库筛选和3AT优化；
文库筛选结果测序分析；
筛选结果回转验证。
详细报告的整理和数据发送。

二、我们的特色

1：使用定制特色文库：使用优化后的clonetech的pGADT7或者pGADT7-Rec2两套载体构建酵母文库；
2：使用商品化cDNA文库。

一、服务详情

(1)无自激活

实验阶段	周期（工作日）	交付材料	报价
A、诱饵质粒的合成及扩增	15-20	1、诱饵质粒 2、自激活检测图片+功能验证图片（膜体系） 3、初筛图片 4、复筛图片 5、测序及分析结果+阳性克隆菌液 6、验证图片+验证的AD质粒 7、验证图片 8、项目报告	询价
B、自激活检测及毒性检测+功能验证（膜体系）	5-7
C、初筛	5-7
D、复筛	2-4
E、阳性克隆测序	2-4
F、一对一验证（点对点）	5-7
G、点板验证	3-4
K、项目结束	1-2
注：功能验证通过证明该诱饵适用于膜体系双杂筛库系统，功能验证没有通过实验结束。

(2)有自激活

实验阶段	周期（工作日）	交付材料	报价
A、诱饵质粒的合成及扩增	15-20	1、诱饵质粒 2、自激活检测图片+功能验证图片（膜体系） 3、自激活抑制图片(45mM3-AT浓度不能抑制实验结束) 4、初筛图片 5、复筛图片 6、测序及分析结果+阳性克隆菌液 7、验证图片+验证的AD质粒 8、验证图片 9、项目报告	询价
B、自激活检测及毒性检测+功能验证（膜体系）	5-7
C、自激活抑制	5-7
D、初筛	5-7
E、复筛	2-4
F、阳性克隆测序	2-4
G、一对一验证（点对点）	5-7
H、点板验证	3-4
I、项目结束	1-2
注：功能验证通过证明该诱饵适用于膜体系双杂筛库系统，功能验证没有通过实验结束。